如何校准土壤脲酶?

土壤脲酶,就是Solid-Urease和S-UE,这个测它的试剂盒给的是分光光度法,管里有50管能做24样,在正式测之前,一定要拿2-3个看着差别挺大的样本先试试水。S-UE能把尿素给水解了,生成氨和碳酸,这酶的活性跟土壤里的微生物多不多、有机质多少、全氮还有速效氮的量都有正关系。它反应了土壤里氮的状况。原理就是用靛酚蓝比色法去测水解出来的NH3-N。做这个实验得自己准备些东西:可见分光光度计、水浴锅、可调的移液器、1mL的玻璃比色皿,还有甲苯(这东西快递不让寄)。试剂成分得这么配:试剂一是甲苯10mL一瓶,放冰箱4℃保存;这是自备的;试剂二是粉剂一瓶,用的时候加20mL蒸馏水搅拌好备用;没用完的也放4℃;试剂三是65mL的液体;试剂四的A液1mL和B液4mL,用的时候把A倒进B里混好;这两样都得放4℃存一周;试剂五是5mL的液体。 咱们用生化试剂盒做检测大概分六大步:前期准备、配试剂、调参数、校准质控、测样本、算结果。详细讲就是: 一、前期准备 1. 检查试剂盒里的东西全不全、有没有变质浑浊啥的,从冰箱拿出来拿到室温平衡一会儿,轻轻晃一晃备用。 2. 看看样本对不对,比如血清得离心过或者组织匀浆处理过;如果样本要稀释或者得去点干扰物,提前做完这些活。 3. 把仪器预热好擦擦干净准备好枪头和反应杯。 二、配试剂(如果有需要) 1. 如果是即用型的就直接用就行。 2. 需要混的就按比例对好现用现混别放久了失效。 3. 校准品要用指定的水或者盐水给它稀释到几个不同的浓度(一般是0、20、40、80、160 nmol/L这几个点)。 三、调参数 1. 根据说明书设置方法(终点法或速率法)、孵育温度(一般是37℃)和反应时间。 2. 选好波长看反应产物吸光峰在哪个位置(比如450或540 nm),如果有背景干扰还得设个副波长来校正。 3. 弄清楚加多少试剂加多少样本(比如R1 200微升加样本20微升)。 四、校准质控 1. 把配好的几个浓度校准品轮流倒进反应杯按参数跑一遍,记录下读数;用浓度当横坐标、读数当纵坐标做图(用Spline拟合或者线性回归),要求R²得大于0.990才行。 2. 再测几个高、中、低三个水平的质控品看结果对不对在靶值范围内;不对的话就得检查是试剂坏了还是仪器坏了还是操作错了。 五、测样本 1. 按照设定的比例先加R1和样本孵育一会儿再加入R2别弄错顺序。 2. 保持在37℃孵育够时间别不足也别过头。 3. 跑完反应仪器自动读出数据记录下来。 六、算结果记录 1. 拿着画好的标准曲线去算每个样本的浓度或者活性(公式大概就是用样本读数减空白读数再乘校准品浓度再除以校准品读数减空白读数)。 2. 把结果写下来还要标上相关系数和质控结果方便以后查。