微生物检测，这门学问，要想从接种一路走到长期保存，可不是件容易的事。01接种这一步，是把微生物给“搬”到培养基上，让它们找到适合自己生存繁殖的地盘。不管后面的步骤有多复杂，这一步的无菌操作必须严格执行。 来看看常用的工具清单：接种针、接种环、接种钩、玻璃涂棒、接种圈、接种锄、小解剖刀，这些家伙事儿可不能少。再说说接种的方法，有8种主流手法。第一种是划线接种，这个方法最经典，用接种环在培养基表面来回划线，细菌浓度被稀释，最后长出一个个孤立的菌落。第二种是三点接种，给霉菌“排排坐”，滴成三个点，方便观察形态。第三种是穿刺接种，专门对付厌氧菌和运动型细菌。用接种针蘸取菌种沿着管中心直线扎下去。第四种是浇混接种，把液体和琼脂混合摇匀后倒进平板里凝固。第五种是涂布接种，先倒平板等凝固后再用刮刀均匀地涂抹菌液。第六种是液体接种，要么是把液体洗进液体里，要么是从液体转到固体中。第七种是注射接种，给活体打疫苗时经常用到注射器把菌液打入体内。第八种是活体接种，病毒必须在活体内才能复制生长。 进行无菌操作的时候有个六步口诀：先灭菌再挑菌苔、快速接种然后塞好棉塞、每一步都少不了火焰灭菌。到了02分离纯化这一步，就是要把混在一起的微生物给分开来，让它们各回各家。这里有6种方法能帮你拆盲盒。 倾注平板法是倒模式稀释；涂布平板法是“涂脸”式稀释；平板划线法则是拉线再拆线；富集培养法是定向喂养；厌氧法就是隔绝空气；单细胞分离法就是在显微镜下直接挑取单个细胞或者孢子。 03培养阶段就是要给微生物提供吃好喝好的环境让它们长胖。氧气对好氧菌来说是“双刃剑”，缺氧对厌氧菌来说也是一样。好氧培养可以用摇床振荡供氧，厌氧培养则需要除氧和替换氮气或者二氧化碳。 固体培养基和液体培养基各有优缺点：固体方便观察菌落形态和挑取单个菌落；液体摇床振荡能让细菌快速增殖。04常规鉴定技术主要是看形态做生化测成分这三样。 观察形态结构和培养特性时可以染色后镜检细胞壁膜核鞭毛芽孢等结构；生化试验就像是化学反应版的身份证；常见的生化反应有糖酵解试验、淀粉水解试验、V-P试验、甲基红试验、靛基质试验、硝酸盐还原试验、明胶液化试验、尿素酶试验、氧化酶试验、硫化氢试验还有三糖铁/SIM琼脂综合试验等。 化学成分分析方面可以通过PCR、质谱和API鉴定系统来补充生化短板提高准确率。05微生物保存这一步核心思路就是低温真空干燥让细胞进入休眠状态并保持遗传稳定性。 定期移植法每隔3到6个月移种一次适用于短期使用；液体石蜡法用石蜡覆盖斜面隔绝空气适用于4到6摄氏度保存；真空冷冻干燥法先预冻再升华封存适合长期保存；-80摄氏度低温冻结法用保护剂程序降温深冻库保存；液氮超低温冻结法程控降温后存于-196摄氏度液氮中可锁住房命几十年。