咱们平时常说的免疫组化，实际上叫 IHC，它主要是利用抗原和抗体的这种特异性反应，来精准定位肿瘤相关的东西。这种技术在短短十几年里就从实验室走到了临床，成了咱们搞肿瘤病理诊断和鉴别的“金标准”。它不光能帮咱们弄清楚肿瘤是哪儿来的，还能看出它分化的程度，给后面的治疗指指路。 接下来咱们聊聊具体的步骤。取材这一步，厚度特别重要，一般建议切到0.2到0.3厘米左右比较稳当。要是切太厚，抗原修复的时候整片就容易掉下来；切太薄了，那些细微的阳性信号又容易找不到。所以把这道关口把好了，后续的活儿才能做得顺溜。要是连普通的H&E染色都糊成一片，IHC多半也会出岔子。 固定的时候呢，福尔马林还是最划算的选择。它能把细胞结构留住、抗原也能测出来，性价比很高。组织离体以后常温固定个8到24小时就行，最多别超过30分钟。固定时间太长蛋白会交联，抗原位点就被“锁死”了，那时候就得靠抗原修复来补救了。那些含酸或者含汞的固定液最好别碰，它们会直接毁了抗原。要是要脱钙的话，最好先在福尔马林中预固定48小时，这样能少受酸的二次伤害。 浸蜡的时候温度也得控制好，58到60摄氏度比较稳妥。石蜡最好每周换一次，二甲苯别堆太多。要是二甲苯浓度太高或者温度太高，组织会变脆、细胞会收缩，稍微动一下就容易掉片。 切片的厚度控制在3到4微米是个黄金值。太厚了容易掉片，太薄了信号又不明显。 裱片前一定要给玻片硅化一下，这样粘片就不容易失败了。 硅化玻片自己做也不难：先用酸洗一下载玻片，流水冲干净后烤干。 然后把载玻片放到2%的APES无水酒精里泡1到2分钟。 接着再用无水酒精快速冲洗一下。 再用蒸馏水快速冲洗一遍。 最后烤干密封起来备用。现用现配比较保险。 烤片的温度和时间也别太猛了：60到65摄氏度烤个30到60分钟就行；有的实验室会烤过夜。有文章说超过60摄氏度且烤超过18小时后，染色强度反而会下降，高温会加速抗原的氧化。 切片保存这块儿也有讲究：好多实验室喜欢把切好的片子直接放室温里不管不顾。迈新实验发现这样不行：室温放三个月抗体信号差不多减半了；放半年后大部分抗体就“熄火”了；放一年后偶尔能看到微弱的阳性信号，但核抗原基本都丢了。 原因就是空气里的氧化作用在捣鬼。 我建议科研级别的集中实验最好把切片放4摄氏度冷藏或者蜡封保存。 临床级别的常规检测最好是现切现染，最多别超过一周。 脱蜡这步虽然和常规的H&E一样操作步骤一样，但必须单独设一个脱蜡罐和试剂系统。 为了防止交叉污染导致背景非特异性着色太严重了。彻底脱干净蜡是抗体准确结合的前提条件。