在2017年，Mariotti和他的同事们搞出了一个新招数，叫FAN（Fixed Apoptotic/Necrotic），这可是给流式细胞术的凋亡检测打开了一扇新大门。传统的Annexin V和PI（碘化丙啶）组合虽然经典，但用起来太费劲。Annexin V能找着细胞膜表面露出的PS（磷脂酰丝氨酸），PI能区分晚死的和坏死的细胞，可这一套有不少硬伤。多聚甲醛这种固定剂会把荧光给淬灭了，让人头疼；样本还得马上测，不然信号飘得没影；要是碰上结核杆菌这种病原体，直接拿来测太不安全；最难受的是没法做胞内染色，想研究里面分子的变化都不行。 这一次，FAN法直接用耐固定的试剂来替代旧方法。用来识别PS的换成了抗磷脂酰丝氨酸抗体，这个和钙离子没关系，固定后信号稳得很。用来区分死活的PI也不用了，换成胺反应活力染料（ViD），它能死死地粘在细胞里的胺基上，破膜也不怕信号跑了。 FAN法的好处多得很：它能让样本先固定再破膜，不管是结核还是别的病原体都能安全地测；也能顺便做胞内染色，看看MHC-II和TNF-α这些分子的表达情况；结果跟以前的Annexin V/PI方法比对过，基本一模一样；把样本放在4℃或者室温避光放两周再复测，变异也小得很；破膜洗干净了之后，死细胞不会胡乱吸附抗体，数据也就更准确了。 总而言之，FAN法算是帮流式细胞术解决了大麻烦。它不仅能帮我们看清Apoptotic（凋亡）和Necrotic（坏死）的细胞情况，还能顺便看看II（MHC-II）和ViD（活力染料）这些指标。这下子科研和临床都能用得上它了，真的是把流式福音给咱们带来了。