在神经科学研究中，Cyanine3 Cholera Toxin Subunit B（Cy3 CTB）是个非常厉害的家伙，它把霍乱毒素B亚基和Cy3花菁染料粘在一起。Cy3这种染料能发出橙红色荧光，波长大约在550到570纳米之间。之所以这么做，就是为了给细胞膜上的GM1神经节苷脂做标记。 这个探针有两个绝活：一是Cy3的亮度特别高，摩尔消光系数能到150,000，就算在GM1表达不多的细胞里，也能清楚地看到信号；二是Cy3的光稳定性很强，抗漂白能力比FITC这种老染料好多了。 既然CTB本身是个五聚体的蛋白质，分子量大概55 kDa，它还会主动去找细胞膜上的GM1受体。所以这两种东西凑一块儿，亲和力特别强（Kd差不多是10⁻¹⁰ M），能降低背景噪音。 通常的做法是用NHS酯法把它们连起来。具体来说，就是Cy3上的活性酯基团会跟CTB表面赖氨酸的ε-氨基反应，形成一个稳定的酰胺键。一般一个CTB五聚体上会挂上2到4个Cy3分子，这样既能保证荧光亮，又不会把蛋白弄死。 大家选它的时候得考虑几个点：如果你要追踪神经回路或者看脂筏的分布，这就是首选；如果你想做超长时间的成像或者特别怕背景噪杂声，那AF555 CTB（也就是Alexa Fluor 555）会更好；如果对穿透力没那么高要求，只想在普通显微镜上用TRITC/Cy3通道直接看，选Cy3更划算。 实验操作的时候得注意避光，别让它晒到光。建议保存在-20℃的柜子里。浓度方面也不能太高，太高容易乱七八糟地粘在一起或者非特异性结合。可以多试几个浓度（一般在0.1到1微克每毫升之间）。 如果要标记某一类特定的细胞，最好先用含BSA的缓冲液把样本泡一下，这样能减少那些乱七八糟的背景信号。 多色实验的时候要小心点。因为Cy3的光谱跟FITC这种绿色染料有点重合，容易出现Bleed-through（光谱窜色）。所以在设计实验前得先单染一下看看情况，必要时得重新调调滤光片。 除了这些还有很多关联试剂可以用，比如AmineBODIPY、BODIPY R6G Methyl Ester、Texas Red-X NHS ester、5-FAM DBCO、Concanavalin A-FITC、Fluorescein-PEG3-AmineDusQ 2 dT phosphoramidite、Cyanine7 phosphoramidite、VIC azide, 6-isomer、FITC conjugated GelMA、Ovalbumin,Cyanine5 labeled、Ovalbumin,Cyanine5.5 labeled、Ovalbumin,Cyanine7 labeled、Ovalbumin,HRP labeled、Ovalbumin,Biotin labeled、Ovalbumin,Rhodamine labeled、N-Mal-N-bis(PEG2-t-butyl ester)、Alexa Fluor 430 N-hydroxysuccinimide ester等等。 （本文内容由陕西新研博美生物科技有限公司木南整理）