骆驼血清转铁蛋白是个挺有意思的蛋白，分子量显示73,000和63,000两个峰，它的N端五肽序列是Met-Pro-Asp-Lys-Thr。不过这个蛋白有点特别，在生理pH下不和人胎盘转铁蛋白受体结合，和普通哺乳动物的转铁蛋白不太一样。为了搞清楚它到底长什么样，这回咱们用胰蛋白酶去切它，想看看能不能把它切成两个能结合铁的结构域。这次实验的材料准备是Fe²⁺饱和状态下的骆驼血清转铁蛋白。酶解条件是用TPCK-胰蛋白酶，在37℃、pH8.0的环境里切16个小时。切好的混合物用Sephadex G-75柱层析，把峰I和峰Ⅱ给收集起来透析冻干备用。 结果显示，峰I跑出来的样子跟原来的完整分子几乎一样，还是橙红色的，SDS-PAGE图(Fig.5)显示它和鸭Tf分子量差不多，所以咱们推测它可能是没被切成两半的完整分子或者是半分子片段。峰Ⅱ分子量在35kDa左右，正好是半分子的样子，和文献里说的牛Tf的N端C端结构域对上了。用Western blot确认了一下，峰Ⅱ只有一个铁结合位点，说明咱们真把两个独立的结构域分出来了。 牛、羊还有骆驼的血清转铁蛋白在生理pH下都不和人胎盘受体结合，而且都能被胰蛋白酶切成N端C端两个结构域。这说明反刍动物的转铁蛋白在结构上挺一致的，跟那些非反刍的哺乳动物差别很大。以后还得比较一下氨基酸序列和三维结构看看受体识别位点到底差在哪。 这次咱们用胰蛋白酶把骆驼血清转铁蛋白给切开了，成功得到了两个含铁的结构域，证实了反刍动物的血清转铁蛋白在受体特异性和酶解模式上特别相似。以后还要多研究它们的氨基酸序列和晶体结构看看它们是怎么适应沙漠里铁不够用和胎盘屏障这种情况的，说不定能给贫血防治和输血安全提供点新点子。