先给大家介绍一下这个免疫球蛋白G的酶联免疫分析试剂盒，这东西只能拿来做研究用。它能检测的范围挺宽的，48T的版本能测到2μg/ml到85μg/ml之间。这个试剂盒的作用就是量一下人血清、血浆还有其他相关液体里的IgG含量。 原理就是个双抗原夹心法。我们用纯化的抗原包被微孔板，做成固相抗原。往小孔里先加IgG，然后再配上HRP标记的抗原，它们就会结合成抗原-抗体-酶标抗原复合物。把多余的东西洗掉以后，再给它加TMB显色剂。TMB在HRP的作用下会变成蓝色，然后酸一捣乱就会变成黄色。颜色越深，说明样品里的IgG就越多。最后用酶标仪在450nm波长下测吸光度，对照标准曲线就能算出具体的浓度了。 盒子里的东西主要有样本处理和操作说明。先说说样本的处理要求： 血清得室温自然凝固10到20分钟，然后用2000到3000转/分的转速离心20分钟左右。小心把上清液收起来存着，如果发现有沉淀就再甩一次。 血浆要看标本需求选EDTA还是柠檬酸钠当抗凝剂，混合10到20分钟再离心20分钟左右，处理方法跟血清差不多。 尿液用无菌管装着离心20分钟左右就行，处理也是一样的。胸腹水和脑脊液参照尿液的做法就行。 细胞培养上清如果要测分泌出来的东西就用无菌管收集；如果要测细胞内部的成分，就先用PBS把细胞悬液稀释到100万/ml左右。把它反复冻融一下破坏细胞释放内部物质，再离心20分钟左右把上清液收起来存好。 组织标本切好称重后加PBS泡着用液氮速冻。融化后还要保持2到8℃的温度再加点PBS匀浆打散；再离心20分钟左右收好上清液一份做检测剩下的冻起来备用。 样本最好采集后马上处理完试验做掉；如果没时间做就放-20℃保存但千万别反复冻融。 还有啊！含NaN3的样品不能测！因为NaN3会把辣根过氧化物酶（HRP）给搞瘫痪了！ 接下来是操作步骤： 第一步先把标准品稀释好。这试剂盒自带一个原倍的标准品，你可以照下面这张表在小试管里配成不同浓度的。 第二步加样。你得留出几个空白孔别加东西；标准孔和待测样品孔都要加。标准孔直接加50μl的标准品；待测孔先加40μl稀释液再滴入10μl样品（相当于稀释了5倍）。 加样的时候记得把液体滴到孔底尽量别碰内壁，轻轻晃一晃混匀了就行。 第三步温育。盖上封板膜扔到37℃的环境里孵育30分钟。 第四步配洗液。把浓缩的洗涤液用蒸馏水稀释30倍（如果是48T版本的就稀释20倍）备着用。 第五步洗板。小心揭开封板膜把废液倒掉甩干水分；每个孔加满洗液静置30秒后倒掉再重复5次；最后把水拍干。 第六步加酶。除了空白孔其他每个孔都要滴入50μl的酶标试剂。 第七步再温育一次操作跟第三步一样。 第八步再洗一遍操作跟第五步一样。 第九步显色。先给每个孔各加50μl的显色剂A和B轻轻混好；然后放在37℃的暗处显色10分钟。 第十步终止反应。每个孔都要加50μl终止液这时蓝色就会立马变黄。 第十一步读数了！用空白孔把机器调到零位；然后在450nm波长下依序测量每个孔的吸光度值（OD值）。 记住啊！一定要在加完终止液的15分钟内完成测量！ 还有几个注意事项得跟你唠叨唠叨： 试剂盒从冰箱里拿出来别急着用先在室温下放15到30分钟让它缓一缓；打开的酶标板没用完要赶紧装进密封袋里存好别受潮。 浓洗液有时候会有结晶析出稀释的时候可以热水泡一下帮它溶开；洗的时候不影响结果你放心用就行。 每次加样都得用加样器并且经常检查一下准不准；为了避免误差最好一次操作在5分钟内搞定样本多的时候推荐用排枪一次过更省事。 做试验的时候最好同时做个标准曲线最好做两个复孔对比一下；如果样本浓度太高了（OD值比标准品第一孔还高）先拿样品稀释液按比例稀释一下再测计算的时候别忘了最后乘以总稀释倍数（n×5）。 封板膜就是一次性的用完就扔不能重复用避免交叉感染。 显色剂要避光保存不然就失效了。 严格按照说明书上的步骤来走实验结果必须听机器的准数！ 所有的样品、洗液还有废弃物都要按传染物处理别不当回事儿！ 不同批次的试剂可千万别混用！ 关于保存条件跟有效期： 盒子要存放在2到8℃的环境里；保质期是6个月。 再说说这个试剂盒的性能咋样吧： 样品线性回归跟预期浓度的相关系数R值能做到0.990以上挺不错的；批内误差不超过9%、批间误差不超过11%。 这家试剂盒是武汉赛培生物科技有限公司生产的他们做的挺细致的。