现在的分子诊断里，把核酸从临床样本里拿出来特别难。你想啊，一滴血或一根拭子里头，不仅有细菌的DNA，还有病毒的RNA，再加上样本种类多得很，像全血很黏稠、拭子有时干有时湿、粪便颗粒还大，再加上实验室要保证通量、灵敏度，还得防止交叉污染，所以这提取过程老是成了瓶颈。为了解决这个问题，MACHEREY-NAGEL推出了NucleoMag®Pathogen试剂盒。他们给这个过程做了一步到位的流程，从磁珠吸附到洗脱都封闭起来了。Hamilton和MACHEREY-NAGEL联手在NIMBUS Presto工作站上进行验证，结果显示，这个方案给96孔板提供了高通量处理能力。还不需要人工开盖操作，交叉污染率低到1%以下。这样一来，“费时、费力、高风险”的问题全都给解决了。这个过程一共就十分钟。先拿200微升的液体或均质样本加上蛋白酶K、载体RNA和裂解缓冲液，室温孵育五分钟。接下来把结合缓冲液NPB2加进去，核酸就会顺着磁珠给抓住。接着用低离子强度缓冲液NPE5清洗三次把蛋白和盐离子都给去掉。最后风干一下再用洗脱缓冲液NPE5把核酸给“请”出来。这个平台还能同时处理96个样本呢。 在应用方面，这个方案通过了灵敏度和交叉污染的考验。他们拿MS2噬菌体RNA在临床模拟液中做了测试。把MS2噬菌体RNA按不同浓度加入200微升液体中提取后检测显示：回收率达到了90%以上，最低检出限只有10²拷贝/毫升，灵敏度足够筛查呼吸道病毒。同样地，在T7噬菌体DNA实验中也显示回收率超过了85%，最低检出限也是10²拷贝/毫升。他们还做了交叉污染实验，在同一96孔板里做阳性和阴性对照的平行提取结果显示阴性孔Ct值大于35而阳性孔信号强且一致，交叉污染概率小于1%。 有了这个组合方案NIMBUS Presto工作站和NucleoMag®Pathogen试剂盒,你再也不用为换标本而换方法了。不管是检测呼吸道合胞病毒还是SARS-CoV-2, 或者是耐药菌,只要换一下探针和引物就能在同一个平台同一个流程里运行。真是省事儿又省心。