cf488a-bsa和cf405m-bsa

咱平时在实验室里打交道的CF488A-BSA还有CF405M-BSA,这俩其实就是把牛血清白蛋白(BSA)跟CF系列的荧光染料凑一块儿了。BSA这人就挺实在,生物相容性好,还能当个载体帮着干活。这两种探针把BSA的长处全给留住了,染料又把光信号给带了起来。 CF488A-BSA发绿光,波长就在488到495纳米之间激发,515到520纳米发射。这亮度高、光稳性强,适合搞长时间的成像,或者做多色实验。CF405M-BSA就有点不同了,它是蓝紫光的,激发在405到408纳米,发射在425到452纳米。量子产率高、发射峰窄,特别适合多色分析或者深部组织成像,超分辨显微镜下面用也挺带感。 这俩家伙是怎么绑在一起的呢?主要是靠NHS酯跟BSA上的赖氨酸残基发生酰胺化反应,把键子给扣死了。这样一来就比较牢靠,既保留了BSA原本的构象和活性,又没怎么变样。 CF488A因为亮度高还带负电少,对蛋白的等电点没啥影响。它耐光漂白性能强,特别适合盯着活细胞看动态变化。CF405M发射的光谱比较窄,少了不少光谱重叠的烦恼。它在水里的溶解性也好,抗光漂白能力更是一绝。BSA本来就能结合脂肪酸和药这些东西,这俩荧光探针加上去以后照样好使,拿来研究细胞吃进去东西、送药什么的挺合适。 具体能用来干啥呢?CF488A-BSA就像个侦察兵一样,可以把细胞表面的受体或者糖蛋白给标出来。它还能顺着细胞吞下去的路径一路追踪下去。要是想看看活细胞长时间怎么变化的,就用它最保险。 CF405M-BSA本事更大一点,它能跟别的颜色一起搭配用。比如给AF647这个红色染料当副手做个双通道成像。它的穿透性好,特别适合往深层的组织里扎。 要是做免疫实验或者分子检测,比如用流式细胞仪做的那种流式检测、定量蛋白质(尤其是那些特别少的蛋白),这两个探针也很靠谱。甚至做核酸研究的时候做原位杂交荧光标记也能用得上。 想知道药物载得稳不稳、释放快不快?或者想看纳米颗粒表面的变化情况?甚至是想看看蛋白质会不会黏在别的材料上?这时候都可以拿CF488A-BSA或者CF405M-BSA来测一测。 选这俩的时候得看情况:设备上要是用488纳米的激光就挑CF488A;要是用405纳米的就拿CF405M。要是想长时间盯着看或者看动态变化的图就挑CF488A(它更耐折腾);要是要做多色的复杂图或者做超分辨显微成像的话就用CF405M(它发光的时候不会串到别的颜色里去)。 做活体研究或者往组织深处跑的时候通常选CF405M(穿透能力强),有时候也会选CF488A(亮度高)。要是想做多色兼容的效果呢?可以把CF405M这个蓝色的和CF488A这个绿色的一块儿用,再配上红色的或者远红外的染料(比如AF647),就能实现多通道的漂亮成像了。 平时保管和操作的时候得小心点:冻干粉得放在零下20度的冰箱里避光存着。复溶的时候把它分装成小份的,免得老冻融把东西弄坏了。戴手套操作最好别直接用手碰。 工作浓度得试着调一调(一般都是微克每毫升那个级别)。太高了容易弄出非特异性结合或者伤害细胞的毒性来。 拍片子的时候记得用抗淬灭的封片剂(比如含DABCO的)。控制好曝光时间和激光的功率别太猛了。要是做活细胞实验得先验验看这标记会不会把细胞给弄死了。 废弃的废液里有毒得按规矩扔不能乱来。这东西只准做实验用不能给人身上用。 最后做实验前得自己先做个小实验看看标记效率高不高、专不专一、会不会影响到样本的活性或者信号强度啥的。 顺便还提一下跟它相关的那些试剂:什么DBCO-PEG5-GGG-AmineSulfo-Cy3-AzideAF750啊、Alexa Fluor750 Tyramide啊、AF750 TSA Conjugates啊、BCNSiR-PEG4-NHS ester啊、SiR-PEG4-C6-ClHMSiR-Carbamate-BGHMSiR-Amide-DBCO之类的也都在这呢(本文内容由陕西新研博美生物科技有限公司木南整理)。